實(shí)驗(yàn)試劑

牛肉膏、蛋白胨、NaCl、瓊脂等

實(shí)驗(yàn)設(shè)備

試管、三角瓶、燒杯、量筒、玻璃棒天平、牛角匙、高壓蒸汽**鍋等

實(shí)驗(yàn)步驟

1. 牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的制備

   1) 計(jì)算  根據(jù)配方計(jì)算出實(shí)驗(yàn)中各種藥品所需要的量，然后再分別稱量。

   2) 稱量  準(zhǔn)確稱取各種成分。一些不易稱量的成分如牛肉膏，可用玻璃棒取出放硫酸紙上稱量，然后連同硫酸紙一起放入燒杯中。

   3) 溶解  向燒杯內(nèi)加入所需的水量，將牛肉膏用水洗下后，取出硫酸紙棄去。加熱攪拌全溶后稍放冷。

   4) 調(diào)pH值  用酸度計(jì)或精密pH試紙測(cè)定其pH值，并用10％NaOH調(diào)至所需pH值，必要時(shí)用濾紙或脫脂棉過(guò)濾。一般比要求的pH高出0.2，因?yàn)楦邏赫羝?*后，pH常降低。

   5) 分裝  根據(jù)不同需要，可將配好的培養(yǎng)基分裝入配有棉塞的試管或三角瓶?jī)?nèi)（附圖1-1）。注意分裝時(shí)避免培養(yǎng)基掛在瓶口或管口上引起雜菌污染。如液體培養(yǎng)基，應(yīng)裝試管高度的1/4左右；固體培養(yǎng)基裝試管高度的1/5左右；裝入三角瓶的量以三角瓶容量的一半為限。

   6) 包扎  試管扎成捆。試管和三角瓶的棉塞外用硫酸紙和牛皮紙包扎，紙上表明培養(yǎng)基的名稱、配制日期等。

   7) **  培養(yǎng)基用0.1Mpa（15lb/in2）高壓蒸汽**15~20min，

2. 培養(yǎng)基的高壓蒸汽**

**原理：水的沸點(diǎn)可隨壓力的增加而提高，當(dāng)高壓蒸汽**鍋中水煮沸時(shí)，因鍋是密閉的，蒸汽不能溢出，而使壓力增加，水的沸點(diǎn)和溫度也隨之增加。因此，高壓蒸汽**是利用高壓蒸汽產(chǎn)生的高溫，以及熱蒸汽的穿透能力來(lái)達(dá)到**的目的。一般在0.1Mpa（15lb/in2）的壓力時(shí)，溫度可達(dá)121℃只要維持15~20min，就可殺死一切微生物的營(yíng)養(yǎng)體和它們的各種孢子。

**方法：

   1) 加水于**器內(nèi)到規(guī)定的水平面。

   2) 需**的物品（分裝在試管、三角燒瓶中的固、液體培養(yǎng)基），棉塞、硅膠泡沫塞等用防潮紙包好（防止鍋內(nèi)水汽把棉塞淋濕），放入**鍋內(nèi)的套筒中。擺放要疏松，不可太擠，否則阻礙蒸汽流通，影響**效果。

   3) 將**鍋蓋的排氣管插人套筒側(cè)壁的凹槽內(nèi)，關(guān)閉**鍋蓋旋緊螺栓，切勿漏氣。

   4) 打開(kāi)放氣閥，加熱，熱蒸汽上升，以排除鍋內(nèi)冷空氣，排氣約5~ l0min，關(guān)閉放氣閥。

   5) 關(guān)閉放氣閥后，整個(gè)**鍋成為密閉狀態(tài)，而蒸汽又不斷增多，這時(shí)壓力和溫度都上升，直至壓力表指針達(dá)到所需壓力時(shí)，開(kāi)始計(jì)時(shí)，通過(guò)調(diào)節(jié)熱源，維持此壓力到所需時(shí)間。

   6) **完畢，待壓力自然降至0時(shí)，打開(kāi)放氣閥，注意不能打開(kāi)過(guò)早，否則突然降壓致使培養(yǎng)基沖騰，使棉塞、硅膠泡沫塞沾污，甚至沖出容器以外。

   7) 打開(kāi)**鍋蓋，取出已**的器皿及培養(yǎng)基。

   8) **鍋用完后，將鍋內(nèi)剩余的水倒掉，以免日久腐蝕。

3. 微生物的分離與純化

借助于劃線將混雜的細(xì)菌材料逐步稀釋，*后在瓊脂平板上分散開(kāi)來(lái)，使之出現(xiàn)單一菌落而達(dá)到分離純化的目的。

注意事項(xiàng)(牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的制備、微生物的分離與純化)

1. 要嚴(yán)格按配方配制。

2. 調(diào)pH不要過(guò)頭。

3. 高壓**要注意物品不要過(guò)多，加熱后排除冷空氣，到時(shí)降壓回零取物。

4. 劃線法分離純化微生物注意各區(qū)勿相互交叉。